PCR反應(yīng)鑒定阿爾茲海默癥模型鼠子代的基因型
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- 實驗40 PCR反應(yīng)鑒定阿爾茲海默癥模型鼠子代的基因型APPSWE轉(zhuǎn)基因小鼠，又被稱為Tg2576小鼠，最早由Hsiao等創(chuàng)建，將引發(fā)人類早發(fā)型瑞典家系阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的App695雙突變基因(K670N, M671L)通過倉鼠朊病毒蛋白載體導(dǎo)入B6SJL小鼠，取其下一代鼠與C57BL/6小鼠交配而得。APPSWE轉(zhuǎn)基因小鼠子代鼠基因型的鑒定，根據(jù) Jackson 動物中心設(shè)計合成引物序列，上5'-GACTGACCACTCGACCAGGTTCTG-3'，下游5'-CTT GTAAGTTGG ATTCTCATATCC G-3’，以基因組DNA為模板，PCR擴增 APP基因，其產(chǎn)物大小為 350 bp，擴增產(chǎn)物與預(yù)計所擴增APPswe基因大小一致的子代鼠即為APPswe陽性表達鼠。
1、基因組DNA提取的原理
DNA是一切生物細胞的重要組成成分，主要存在于細胞核中。通過研磨和SDS作用破碎細胞；苯酚和氯仿可使蛋白質(zhì)變性，用其混合液（酚：氯仿：異戊醇）重復(fù)抽提，使蛋白質(zhì)變性，然后離心除去變性蛋白質(zhì)；利用RNase降解RNA，從而得到純凈的DNA分子。
用酚抽提細胞DNA時的作用是使蛋白質(zhì)變性，同時抑制了DNase的降解作用。用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。使用酚的優(yōu)點：(1)有效變性蛋白質(zhì)；(2)抑制了DNase的降解作用。缺點：(1)能溶解10-15%的水，從而溶解一部分poly(A)RNA。(2)不
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